Acidofilo se vyrábí zakysáváním kvalitního pasterizovaného mléka čistými kulturami vyšlechtěných mléčných baktérií, které rozloží mléčný cukr (laktózu) na lehce stravitelnou kyselinu mléčnou. Na výrobu Acidofila se používá smetanový zákys skládající se z bakterií rodu Lactococcus a Leuconostoc. Na konci zakysávání se do mléka přidá acidofilní kultura - Lactobacillus acidophilus.

Fermentace (kysání) mléka probíhá v hygienickém prostředí v moderních technologických zařízeních. Hygienická bezchybnost výrobku je zabezpečena systematickým dozorem až po jeho balení a distribuci do obchodního řetězce. Acidofilo se uchovává a konzumuje při teplotě nižší než 8°C.